濾光片在流式細胞儀中應用
流式細胞儀是測量染色細胞標記物熒光強度的細胞分析儀,是在單個(gè)細胞分析和分選基礎上發(fā)展起來(lái)的對細胞的物理或化學(xué)性質(zhì)(如大小、內部結構、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗原等)進(jìn)行快速測量并可分類(lèi)收集的高技術(shù)儀器。
流動(dòng)細胞儀主要有以下五部分構成:
1. 流動(dòng)室及液流系統
2. 激光源及光學(xué)系統
3. 光電管和檢測系統
4. 計算機和分析系統
流動(dòng)室及液流系統
流動(dòng)室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成,常用光學(xué)玻璃、石英等透明、穩定的材料制作。樣品管貯放樣品,單個(gè)細胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射出;鞘液由鞘液管從四周流向噴孔,包圍在樣品外周后從噴嘴射出。為了保證液流是穩液,一般限制液流速度υ<10m/s。
激光源及光學(xué)系統
經(jīng)特異熒光染色的細胞需要合適的光源照射激發(fā)才能發(fā)出熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈和激光;激光器又以氬離子激光器為普遍,也有配和氪離子激光器或染料激光器。
在激光光源和流動(dòng)室之間有兩個(gè)圓柱形透鏡,將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成和細胞的直徑相近,在這種橢圓形激光光斑內激光能量成正態(tài)分布,使通過(guò)激光檢測區的細胞受照強度一致。而光學(xué)系統則是由若干組透鏡、小孔、濾光片組成,主要作用是將不同波長(cháng)的熒光信號送到不同的光電倍增管。
光電管和檢測系統
經(jīng)熒光染色的細胞受合適的光激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光是通過(guò)光電轉換器轉變成電信號而進(jìn)行測量的。光電倍增管(PMT)最為常用。PMT的響應時(shí)間短,僅為ns數量級;光譜響應特性好,在200~900nm的光譜區,光量子產(chǎn)額都比較高。也有用硅光電二極管的,它在強光下穩定性比PMT好。
計算機和分析系統
經(jīng)放大后的電信號被送往計算機分析器。多道的道數是和電信號的脈沖高度相對應的,也是和光信號的強弱相關(guān)的。對應道數年縱坐標通常代表發(fā)出該信號的細胞相對數目。多道分析器出來(lái)的信號再經(jīng)模-數轉換器輸往微機處理器編成數據文件
流式細胞儀主要用到三類(lèi)濾光片:
1:長(cháng)波通濾光片(LPF)--只允許特定波長(cháng)以上的光線(xiàn)通過(guò);
2:短波通濾光片(SPF)--只允許特定波長(cháng)以下的光線(xiàn)通過(guò);
3:帶通濾光片(BPF)--只允許特定波長(cháng)的光線(xiàn)通過(guò)
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常用熒光濾光片組合
常用窄帶濾光片產(chǎn)品
常用生化濾光片
常用長(cháng)波通濾光片
常用短波通濾光片